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1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。
(三)迅速解冻:
1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。
2.约1-2min后冻存管内液体*溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。
(四)平衡离心:
细胞用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心3min
(五)制备细胞悬液:
1.吸弃上清液。
2.向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。
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细胞浓度以5×105/ml为宜。
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将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。
初学者易犯错误:
1水浴锅未预热或者未预热到37℃。
2.水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。
3.离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。
4.一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。